写在前面的废话：
最近颇为烦闷，因为一个新方法的执行出现了偏差被闹得鸡飞狗跳，尽管问题已经找到症结，但是内心依旧极其烦闷，然后就去翻了一下适合自己的招聘信息，然后发现，支原体检查成了当红炸子鸡。第一反应是没做过连人家基本要求都没达到，郁闷，然而做抗体的其实我们是需要进行支原体检查的，只是习惯委外。现在想来疫情开始我就没好好精进自己的技术，忙于杂七杂八的事情都忘记了自己的优势—有一套自己的学习方法和心得。年近不惑，我不能再期望我什么都懂但是我又要什么都能hold住，此刻我明白我不能再贱卖自己也要充实自己。从支原体检查学习开始自己的新生。
正文，后面的是正题
一、支原体是什么
对自己有做的事情有足够的了解有利于我们的学习。已经将大学课本上的知识都已经还给了老师，只能借助词条让自己对支原体有更深的了解。
1．百科里面的描述
（1）支原体属词条下描述
支原体属（）是支原体目、支原体科的1属。旧称类胸膜肺炎微生物（PPLO），是一组无细胞壁、高度多形性的革兰氏阴性微生物。
支原体细胞体积微小，直径不超过纳米，可通过细菌滤器。球状、环状、丝状，有些呈分枝状。丝状体可长达微米。多数不能运动，少数呈现滑动。一般染料着色较困难，以吉姆萨氏法为好，呈淡紫色。可在无活细胞培养基内生长繁殖。由于体积微小，基因组少，生物合成能力有限，需从培养基中取得维生素、核酸前体和氨基酸等比较复杂的营养成分，此外，还需胆固醇等特殊物质，繁殖以二分分裂法为主，生长缓慢，孵育数天至2周开始形成乳头状或荷包蛋”状集落，直径一般不超过～2毫米。小的只能在显微镜下看到。有的株有微弱溶血性，大多数利用葡萄糖或精氨酸作为主要能源。一般不水解蛋白质，少数能液化明胶、凝固血清或酪蛋白，不还原硝酸盐，不产生吲哚，不水解尿素。厌氧下，常还原三苯四氮唑、美兰和亚碲酸钾。有些株对鸡、哺乳动物的红细胞具有吸附现象。抗原结构复杂，至少有型。人株与动物株不同，即使是人类原体，不同株的表面结构还具有型特异性。抗原型别可用生长抑制和免疫荧光等试验鉴定。支原体对热抵抗力小，经15～30分钟或55℃经5～15分钟即灭活。不耐干燥，对重金属盐、石碳酸、来苏儿等化学消毒剂比一般细菌敏感，对表面活性物质、脂溶剂极为敏感。对醋酸铊、结晶紫、亚碲酸盐的抵抗力比细菌大，培养基中加入适当浓度，可作为分离培养时防上杂菌污染的抑菌剂。对青霉素、多粘菌素、短杆菌肽抵抗。中的G+C克分子含量为23～40％
（2）支原体词条下的描述
支原体（）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为～0.3微米。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。支原体广泛存在于人和动物体内，大多不致病，对人致病的支原体主要有肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。巨噬细胞、及IgM对支原体均有一定的杀伤作用。
革兰染色为阴性，但不易着色，一般用染色，染成淡紫色。支原体主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成丝状后断裂呈球杆状颗粒。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为，最适pH值为7.8～8.0。在固体培养基上培养，形成典型的荷包蛋”状菌落。支原体抵抗力较弱，对热、干燥敏感，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感，对红霉素、四环素、螺旋霉素、链霉素、卡那霉素等药物敏感，但对青霉素类的抗生素不敏感。
2．划重点：
（1）支原体没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为～0.3微米。
Ø没有细胞壁代表了其自我保护方式相对于细菌有很多不足，因为没有细胞壁的保护对化学消毒剂较细菌更为敏感；其最外部包裹的细胞膜主要是磷脂双层结构，因此其对表面活性剂的抵抗力不足（相似相溶），我们不需要针对支原体建立一套新的消毒灭菌体系，针对细菌的那一套对支原体依旧有效。
Ø没有细胞壁也会导致一些靶点不存在而使得支原体对作用于细胞壁的某些抗生素不敏感；
Ø高度多形性，这点在我们日常观察中就不能跟普通细菌一样界定为其为杆菌或球菌一样，通过镜检来对其进行鉴别，镜检过程中所有形态的疑似物都可能是我们需要注意的目标。
Ø能通过除菌滤器，因为其大小为0.1~0.3微米，通常意义的0.2微米的滤器作用就有限了，如果使用0.1微米的滤器还是可以达到目的的；
（2）生物合成能力有限，需从培养基中取得维生素、核酸前体和氨基酸等比较复杂的营养成分
由上可知支原体跟我们现在的一些极简主义人士有点类似，需要吃好喝好又不在乎钱，借鉴疫情隔离留给我们的经验，断水断粮是对付支原体的好方式。
对于支原体菌株进行传代和培养时我们又需要注意营养的供给。
（3）大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为，最适pH值为7.8～8.0。在固体培养基上培养，形成典型的“荷包蛋”状菌落。
Ø药典中的温度为什么是36±1℃因该温度范围是其最适宜生长温度，因其生长较慢，对细菌的18~24h对支原体就不太现实了，3~5天甚至更久可能更适合；
Ø最适pH为碱性，因此在培养基配制和出现异常时都需要注意pH的变化，对于精氨酸支原体肉体培养基，可能会出现pH便酸性的状况就可能导致检验结果假阴性。
Ø在固体培养基上培养有典型的“荷包蛋”状菌落
（4）有些株对鸡、哺乳动物的红细胞具有吸附现象
Ø支原体在污染细胞48小时后，绝大多数支原体在细胞外，只有极少部分能通过接触侵入或者细胞融合进入细胞内。一个细胞能够附着约1000个支原体。
Ø支原体吸附在细胞表面可能会引起细胞特性的变化，因此对于一些试验控制支原体是必要的。
（5）支原体主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成丝状后断裂呈球杆状颗粒。
Ø二分裂方式繁殖可以实现对数增长，一旦污染后开始繁殖其危害将不可估量。
二、为什么跟支原体过不去
在中国食品药品检定研究院老师的《支原体检查的核酸检测方法及方法学验证的思考》一文的描述如下：自年研究人员首次在细胞培养中发现支原体污染以来，支原体污染问题无处不在，包括以细胞为基质生产的生物制品，如病毒性疫苗、重组生物技术产品等。在生物制品生产过程中和细胞培养过程中使用的任何动物源性和植物源性材料（如血清、胰酶等）、无机来源成分、操作环境、操作人员、操作习惯及交叉污染等均是引入支原体污染的途径，支原体污染已经成了各国药品监管机构始终关注的影响生物制品安全性的问题之一，因此，支原体污染检查也成了生物制品外源因子污染检查的经久不衰的话题，生物源性原材料、采用细胞培养技术制备的疫苗、抗体、基因治疗产品在生产过程的不同阶段都要进行支原体污染的检查。
上文说了支原体污染问题无处不在，为什么这么紧张支原体污染呢？个人理解有以下原因：
1．支原体基因组小，会改变宿主的基因结构引起其形态变化，这样会导致污染支原体的细胞其生物学特性发生改变或形态异常；
2．支原体生长过程中，特别是进入对数期后会消耗大量营养物质导致细胞被饿死；
3．支原体生长繁殖过程中会产生大量代谢产物进而影响培养环境，如pH值，进而导致细胞生长异常或变异；
4．支原体小且生长较为缓慢，初始污染较难发现，可以目视发现时已大量繁殖；
5．支原体较难去除，生产过程中增加抗生素或抑制剂会增加工艺复杂程度和生产成本；如科学研究或实验中因支原体污染，试验结果可能会发生不可预知的变化等，如蛋白质的表达肯定会出现异常。
6．前面提到的疫苗、重组生物技术产品多数会以注射剂的方式进入人体，支原体本身会引起很多疾病，为了确保药品的安全性，生物制品生产企业进行必要的支原体检查是必要的。
三、支原体污染的来源有哪些
第二部分重点标识内容：在生物制品生产过程中和细胞培养过程中使用的任何动物源性和植物源性材料（如血清、胰酶等）、无机来源成分、操作环境、操作人员、操作习惯及交叉污染等均是引入支原体污染的途径
我们参考细菌污染和细胞培养的过程可以分析发现支原体的污染来源如下：
Ø人：在洁净环境下的最大污染就是人员，人本身携带支原体；特别是人员着装不适宜和操作不规范时容易引入污染；为减少人员污染，我们需要培训人员支原体相关的基础知识，对人员进行更衣考核和无菌操作培训考核等。
Ø机：实验仪器（水浴锅、液氮罐）
Ø料：被污染的细胞；原辅料（血清、胰酶、培养基）实验耗材（培养皿、方瓶）
Ø法：检验方法和取样方法会引入污染，如细胞培养过程不是通过无菌取样进行操作就可能引入污染，因此市场上出现了很多无菌操作取样装置；
Ø环：实验环境，实验环境中的支原体可能来源于人员也可能来源于物料或其外包装。
四、结语
纸上谈兵难免存在谬误，欢迎大家指正。第一部分结束，该部分适用于支原体检查入门的人员。
