写在前面的话:因工艺选择了某细胞计数仪,为了质控和工艺可以更好衔接,我们只能也买了同一款细胞计数仪。原本以为细胞计数仪用起来没啥问题,然而用起来各种异常。约了厂家工程师发现一问三不知,好在后面派了一个靠谱的工程师。分享一下两个工程师带给我们的快乐。
1.哪个帅气的工程师很难过
不知什么原因,随机的两盒计数板存在质量问题(收到新计数板后对比发现),使用时会出现打不满孔甚至打不进去等等情况,第一次使用难免归因于自己对细节掌控不足。因此就去翻了所有自己可以找到的资料,看完有了下图黑色部分的疑问,问完自己又做了思考,标记为红色。然后期待工程师上门安装软件和培训。
细胞计数问题(仅供学习交流用)
天阴沉沉的但是工程师很帅气,让人莫名不爽,嫉妒人家太帅。
打开电脑,工程师说软件安装了啊,那我直接培训吧。然后就是各种翻车现场:
现场1:本着谨慎的态度,我们请工程师帮忙确认安装是否正常。帅哥工程师说我不会确认,我只会按步骤安装。
现场2:然后就先培训软件使用,界面上的Tint F尾色填充是啥意思,工程师说影响荧光颜色标记,必需选上,问为什么呢?帅哥回答就是必需选上没有理由。
现场3:然后各种细节都还没说明书清晰。问他如何建立报告模板,他说机器里面现成模版就行。然而我们想看到图片,默认模板仅有数据。
现场4:关于细胞悬液制备和其他问题,统一回答模板:正常操作就行了。
原来帅气带来的阳光都散了,最后我们小伙伴友好的送走了难过的工程师。
吐槽:也许是我们的问题过于细致,然而作为一个大区技术工程师,连自家软件设置都不会用确实不应该。至于细节和原理更牵强人意,就会说别人家也没你们这么多问题。
2.自救
问题那里就要解决掉,工程师不行只能自己取解决。针对问题进行自己的研究比对,事实证明问题并没有那么难。也不得不承认很多时候我们为了降低自己的成本,总希望从供应商那边获取更多支持,这时候虽然节约了成本,但是对于一些东西反而容易知其然不知其所以然。有时候我们需要自己取进行一些确认实验,这样才能更好的避免异常。有很多同行说实验室容易出各种幺蛾子,也许过于依赖厂家工程师是一个原因。
所有问题中我们最关注的计数误差的问题在耗材没问题的前提下,我们可以借鉴手动计数法的误差来源来优化自己的计数稳定性。在规范这些细节后,K2细胞计数仪变的可爱了很多,总算不用天天自己手动计数了。
随机误差(图片来源于网络,仅供学习交流用)
3.靠谱的人和我们的思路总是那么一致
虽然我们自己解决了问题,但对仪器的了解还是有限,我们还是期望了解更多细节。
新来的工程师看上去颇为年轻但很务实,先是根据我们的需求分享了计数误差可能原因及解决措施,跟我们研究一致。
然后还分享了如何选择染色液的问题。
1)台盼蓝染色法:稳定培养的细胞系,背景干净,活率高。
2)AOPI染色法:复杂的原代细胞;CAR-T,MSC等对活率有高要求的细胞制品。
其中NIST-FDA细胞计数研讨会关于细胞计数方法选择、设计和验证,以及如何确保方法使用规范性的分享,值得借鉴。
1)Fit-for purpose(量体裁衣)原则
A不存在“最好”或“最标准”的计数方法;
B方法的选择取决于细胞样本的属性和计数的最终目的
2)同一细胞计数方法最好适用于产品的开发、生产和放行的整个流程
3)建议尽早建立可靠的细胞计数方法以加速细胞治疗产品的开发和审批。
再就是关于NaCl注射液稀释细胞,荧光变弱也给出了一些解释和建议。
1)细胞样本在从培养基环境更换为生理盐水时,会导致短暂的荧光染色渐弱。
2)该现象可随着样本在盐水中所处的时间延长(约1 h)而有所恢复,因此,在细胞更换盐水后建议在充分换液(3次)后,甚至在盐溶液中稳定一段时间,再进行染色计数。
3)如果在操作上时间紧迫,可以建立专门针对NaCl中细胞的Assay,适当提高曝光时间,降低荧光阈值。
最后对问题进行了其他问题解答并帮我们解决了报告模板设计的细节问题,总体评价是一个合格的工程师。但是也不得吐槽,工程师在刻意规避细胞核和DNA干扰的问题。其次关于聚焦时将明场聚焦改为荧光对焦的回答存在一定的不适宜,一味的只考虑解决问题完全否定明场聚焦,一定程度上缺少严谨的思考。同时也不得不吐槽仪器操作指南里的此步骤可省略。
计数仪操作指南(图片来源于网络,仅供学习交流用)
4.小结
不得不感慨一个好产品并不仅是在于其本身质量,与其服务和技术支持也有不可或缺的关系。这款计数仪综合评价还是可以的,然而首次服务确实不尽人意。
对于我们分析人员来说,获取供应商更多支持是必要的,不过我们也要知其然知其所以然。不能将供应商的话当作真理,这两次沟通会发现,工程师会刻意不提其仪器的不利之处,然而这些认知缺失就容易导致一些偏离。例如计数时的细胞直径是否准确等问题。
以上为个人今天学习小结,受限于个人认知,难免存在疏漏,欢迎交流指正。