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3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法
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本法系用分子排阻色谱法测定人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体含量。
照分子排阻色谱法（通则0514）（
（通则0514））测定。
（通则0514））测定。 色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm、长60cm；以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液（量取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L 磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml，混匀）为流动相；检测波长为280nm；流速为每分钟0.6ml。分别取每lml含蛋白质12mg的人免疫球蛋白、人血白蛋白溶液各20μl，分别注入色谱柱，记录色谱图。人免疫球蛋白对照品单体峰与裂解体峰间的分离度应大于1.5，人血白蛋白对照品单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液，取20μl），注入色谱柱，记录色谱图60分钟。按面积归一化法计算，色谱图中单体峰加二聚体峰的含量，即为IgG单体加二聚体含量。图谱各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。主峰为IgG单体；相对保留时间约0.85的峰为二聚体。
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