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3128 抗毒素/抗血清制品分子大小分布测定法
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本法系用分子排阻色谱法测定抗毒素/抗血清制品中完整IgG和聚合物的相对含量。
照分子排阻色谱法(通则0514)（
(通则0514)）测定。
(通则0514)）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱(SEC，排阻极限500kD，粒度≤5μm)，柱直径7.8mm、长30cm。以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(量取0.5mol/L磷酸二氢钠溶液200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠溶液420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml，混匀)为流动相，检测波长为280nm，流速为每分钟0.6ml。分别取每1ml含蛋白质12mg的人免疫球蛋白、人血白蛋白溶液各20μl，分别注入色谱柱，记录色谱图。人免疫球蛋白单体峰与裂解体峰的分离度应大于1.5，人血白蛋白单体峰与二聚体峰的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液，取20μl)，注入色谱柱，记录色谱图40分钟(标准图谱见图1、图2)。按面积归一化法计算色谱图中F(ab')2、IgG单体和聚合物的相对含量。图谱各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。主峰为F(ab')2，相对保留时间约0.93的峰为IgG单体，相对保留时间约0.88及之前的峰均为聚合物。
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