注射用鼠神经生长因子 - undefined - 《药典三部

　　本品系由健康小鼠颌下腺提取的生物活性蛋白质，经分离、纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。不含抑菌剂。

　　1 基本要求

　　生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

　　2 制造

　　2.1 小鼠颌下腺来源及采集

　　2.1.1 采用体重为20g以上60～90日龄健康雄性小鼠，小鼠应符合清洁级动物相关要求（通则3602与通则3603）勘误采用体重为 20g 以上 60～90 日龄健康雄性小鼠，小鼠应符合检定用清洁级动物相关要求（通则 3601）（

（通则 3601））。

　　2.1.2 采用适宜方法处死小鼠，经局部消毒处理后摘取颌下腺，剔除其他组织后备用。如需存放应冻存于-20℃以下，并规定保存时间。

　　2.2 原液

　　2.2.1 提取

　　采用适宜的方法将小鼠颌下腺破碎匀浆，离心取上清。

　　2.2.2 纯化

　　采用经批准的方法进行纯化、病毒去除或灭活后即为鼠神经生长因子原液。

　　2.2.3 原液检定

　　按3.1项进行。

　　2.3 半成品

　　2.3.1 配制

　　按成品规格配制，并加入适宜稳定剂。

　　2.3.2 半成品检定

　　按3.2项进行。

　　2.4 成品

　　2.4.1 分批

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。

　　2.4.2 分装及冻干

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”及通则0102有关规定。

　　2.4.3 规格

　　18μg（9000U）/瓶或20μg（9000U）/瓶，30μg（15000U）/瓶。

　　2.4.4 包装

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”及通则0102有关规定。

　　2.5 病毒去除和灭活

　　生产过程中应釆用经批准的方法去除和灭活病毒。如用灭活剂（如有机溶剂、去污剂）灭活病毒，则应规定对人安全的灭活剂残留量限值。

　　3 检定

　　3.1 原液检定

　　3.1.1 生物学活性

　　依法测定（通则3530）（

（通则3530））。

　　3.1.2 蛋白质含量

　　依法测定（通则0731第二法），应不低于0.1mg/ml。

　　3.1.3 比活性

　　为生物学活性与蛋白质含量之比。每1mg蛋白质应不低于5.0×105AU）为生物活性与蛋白质含量之比，每 1mg 蛋白质应不低于 4.0×105U。

　　3.1.4 纯度

　　3.1.4.1 电泳法

　　依法测定（通则0541第五法）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于98.0%。

　　3.1.4.2 高效液相色谱法

　　依法测定（通则0512）（

（通则0512））。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.25mol/L磷酸盐缓冲液（含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（85∶15）；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以鼠神经生长因子色谱峰计算的理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，鼠神经生长因子主峰面积应不低于总面积的95.0%。

　　3.1.5 分子量

　　依法测定（通则0541第五法）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，供试品的分子质量应为11.0～15.0kD。

　　3.1.6 等电点

　　主区带应为8.4～9.4，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（通则0541第六法）。

　　3.1.7 紫外光谱

　　用水或0.85%～0.90%氯化钠溶液将供试品稀释至100～500μg/ml，在光路1cm、波长230～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为280nm±3nm（通则0401）（

（通则0401））。

　　3.1.8 细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143）（

（通则1143）），每1支应小于10EU。

　　3.1.9 磷酸三丁酯残留量

　　如工艺中采用磷酸三丁酯，则每1ml中磷酸三丁酯应不大于10μg（通则3205）（

（通则3205））。

　　3.1.10 聚山梨酯80残留量

　　如工艺中釆用聚山梨酯80，则每1ml中聚山梨酯80应不大于100μg（通则3203）（

（通则3203））。

　　3.1.11 鼠源性病毒检查

　　依法检查（通则3303）（

（通则3303）），至少每半年一次，应无任何特定的鼠源性病毒。

　　3.2 半成品检定

　　3.2.1 细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143）（

（通则1143）），每1支应小于10EU。

　　3.2.2 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.3 成品检定

　　除水分测定、装量差异检查、不溶性微粒检查、生物学活性、含量测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。

　　3.3.1 鉴别试验

　　按免疫印迹法（通则3401）（

（通则3401））或免疫斑点法（通则3402）（

（通则3402））测定，应为阳性。

　　3.3.2 物理检查

　　3.3.2.1 外观

　　应为白色或类白色的疏松体或粉末，按标示量加入灭菌注射用水后迅速复溶为无色澄明液体。

　　3.3.2.2 可见异物

　　依法检查（通则0904）（

（通则0904）），应符合规定。

　　3.3.2.3 不溶性微粒检查

　　依法检查（通则0903）（

（通则0903）），应符合规定。

　　3.3.2.4 装量差异

　　依法检查（通则0102）（

（通则0102）），应符合规定。

　　3.3.3 化学检定

　　3.3.3.1 水分

　　应不高于3.0%（通则0832第一法）。

　　3.3.3.2 pH值

　　应为6.0～7.4（通则0631）（

（通则0631））。

　　3.3.3.3 渗透压摩尔浓度

　　依法测定（通则0632）（

（通则0632）），应符合批准的要求。

　　3.3.3.4 辛酸钠含量

　　如制品中加入辛酸钠，则每1支中辛酸钠应不大于0.1mmol（通则3111）（

（通则3111））。

　　3.3.4 生物学活性

　　生物学活性依法测定，应不低于标示量（通则3530）（

（通则3530））勘误应不低于标示量的 80%（通则 3530）（

（通则 3530））。（已修改，原文为：）

　　3.3.5 含量测定

　　采用ELISA或HPLC法，应为标示量的80%～120%。

　　酶联免疫吸附法按试剂盒说明书进行。

　　采用高效液相色谱法（通则0512）（

（通则0512））。

　　色谱条件：以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；以0.25mol/L磷酸盐缓冲液（含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（85∶15）为流动相；检测波长为214nm。供试品溶液中鼠神经生长因子与人血白蛋白的分离度应符合要求。

　　测定法：取供试品和标准品适量，用流动相分别稀释制成每1ml中含鼠神经生长因子50μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录30分钟。标准品溶液、供试品溶液均进样3次，记录色谱图并计算峰面积。按外标法以峰面积计算供试品中鼠神经生长因子的含量。

　　3.3.6 无菌检查

　　依法检查（通则1101）（

（通则1101）），应符合规定。

　　3.3.7 细菌内毒素检查

　　依法检查（通则1143）（

（通则1143）），每1支应小于10EU。

　　3.3.8 异常毒性检查

　　依法检查（通则1141小鼠试验法），应符合规定。

　　3.3.9 外源病毒污染检查

　　采用动物病毒敏感细胞（如BHK21，每瓶（25cm2）培养细胞中加入供试品1ml，37℃培养7天为一代，连续盲传3代，细胞应生长良好，不应出现病毒感染引起的病变，判为合格。

　　4 保存、运输及有效期

　　于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。

　　5 使用说明

　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。