3519 人凝血因子IX效价测定法　(一期法)

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　本法系用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅸ效价。

　　试剂 (1)3.8%枸橼酸钠溶液称取无水枸橼酸钠9.5g，加水溶解并稀释至250ml。

　　(2)咪唑缓冲液(pH7.3) 称取咪唑0.68g、氯化钠1.17g，溶于100ml水中，加入0.1mol/L盐酸溶液42.2ml，再加水稀释至200ml，即得。

　　(3)稀释液取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液，混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%。

　　(4)激活的部分凝血活酶(APTT)试剂。

　　(5)人凝血因子Ⅸ缺乏血浆为人凝血因子Ⅸ含量低于1%的人血浆或人工基质血浆。

　　(6)0.85%~0.90%氯化钠溶液。

　　(7)0.05mol/L氯化钙溶液称取氯化钙(CaCl2·2H2O)147g，加水溶解并稀释至1000ml，配制成1mol/L氯化钙贮存液。临用前，用水稀释20倍，配制成0.05mol/L氯化钙溶液。

　　人凝血因子Ⅸ标准品溶液的制备 用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.85%~0.90%氯化钠溶液将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子Ⅸ，再用稀释液分别做10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴待用。

　　供试品溶液的制备 若供试品中含有肝素，先用硫酸鱼精蛋白中和供试品中的肝素。测定时先用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.85%~0.90%氯化钠溶液稀释成每1ml约含1IU凝血因子Ⅸ，再用稀释液做10倍、20倍或40倍稀释，置冰浴待用。

　　测定法 取激活的部分凝血活酶试剂0.1ml，置37℃水浴中保温一定时间(一般4分钟)，加人凝血因子Ⅸ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml，混匀，置37℃水浴中保温一定时间(一般5分钟)，加入已预热至37℃的0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。

　　用不同稀释度的人凝血因子Ⅸ标准品溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。

　　以人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(IU/ml)的对数对其相应的凝固时间(秒)的对数作直线回归，求得直线回归方程，计算供试品溶液人凝血因子Ⅸ效价，再乘以稀释倍数，即为供试品人凝血因子Ⅸ效价(IU/ml)。

　　【附注】(1)直线回归相关系数应不低于0.98。

　　(2)测定时要求每个稀释度平行测定2管，2管之差不得超过均值10%，否则重测。

　　(3)直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品。

　　(4)釆用全自动凝血仪操作，按仪器使用说明书进行。

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