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3534 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗效力试验
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(大鼠法)
本法系将供试品和参考疫苗经系列稀释后分别免疫大鼠，测定大鼠血清中针对各型脊髓灰质炎病毒的中和抗体并分别计算其ED50，计算供试品各型的相对效力。
试剂 适宜稀释液，M199培养液或MEM培养基。
Hep-2细胞悬液的制备 将长成单层状态良好的Hep-2细胞，弃去上层培养液，加入适量的细胞消化液，消化数分钟后弃去消化液，加入适量培养液，分散细胞进行计数，用培养液调整细胞浓度至每1ml含5×104~10×104个细胞。
参考疫苗和供试品溶液的制备 将供试品和参考疫苗用相应的稀释液进行3倍系列稀释，取原倍、3倍、9倍、27倍和81倍至少四个稀释度进行试验。
测定法 用稀释好的供试品和参考疫苗分别免疫175~250g重量的Wistar大鼠，双后肢大腿肌内注射，每只共0.5ml，每个稀释度至少免疫10只，同性别或雌、雄各半。另取10只大鼠接种稀释液0.5ml作为阴性对照。饲养20~22天后釆血分离血清，56℃灭活30分钟，分别测定各型中和抗体。
在96孔培养板中将1∶4稀释的血清进行2倍系列稀释，每孔50μl，然后每孔加入l00CCID50相应型别Sabin株病毒悬液50μl，置35~37.5℃中和2~3小时，可再经2~8℃放置过夜。加入Hep-2细胞于36℃±1℃培养7天，显微镜下观察记录细胞病变情况。为保证中和试验有效性，同时设置病毒回滴对照和阳性质控血清对照。
以50%细胞孔不产生病变的血清最高稀释度为终点，以稀释度的倒数作为中和抗体滴度。中和抗体滴度＜4为阴性，≥4为阳性，计算供试品和参考疫苗每个稀释度免疫后的阳性率。以统计软件如CombiStats或其他适宜软件，分析供试品与参考疫苗的剂量反应关系，以稀释倍数分别计算供试品与参考疫苗各型的ED50。
结果判定 在试验成立的前提下，供试品各型ED50不显著低于参考疫苗。
【附注】试验成立的条件
(1) 供试品和参考疫苗的ED50均位于最高和最低稀释倍数之间。
(2) 剂量反应线性和平行性应满足统计学要求。
(3) 相对效力值的95%可信区间位于其25%~400%范围内。
(4) 病毒回滴对照和阳性质控血清对照结果应在规定的范围内。
(5) 稀释液阴性对照免疫血清中和抗体滴度应＜4。
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